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    酵母蛋白質的抽提

    放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-06

    此法抽提的酵母蛋白適用于SDS凝膠電泳和Western印跡分析。

    1.從OD600=2的細胞培養物中抽提酵母蛋白質。培養物的一種簡單制備方法是將細胞接種到5ml YPD中,過夜培養后獲得指數培養物(OD600=0.5~2.0)。

    2.在水浴上把OD600=2的細胞培養物轉到含有2ml的50mmol/L Tris-HCl(pH7.5)、10mmol/L疊氮化鈉溶液的13mm離心管中,用吊籃式醫用離心機離心沉淀細胞。

    3.用25號針頭吸出上清液,再用30μl ESB緩沖液懸浮細胞。

    4.快速轉入微型離心管,在100℃下保溫3分鐘,使蛋白酶失活之后,樣品存放于-20℃。

    5.加入0.1g的0.2mm的玻珠,或裝入玻珠直至液體剛好浸沒,劇烈振蕩混合2分鐘。

    6.加入70μl ESB緩沖液,稍加振蕩,置100℃保溫1分鐘。

    ESB緩沖液(可在4℃貯存數天):

    2% SDS

    80 mmol/L Tris-HCl (pH 6.8)

    10% 甘油

    1.5% 二硫基蘇糖醇(DTT)

    0.1mg/ml 溴酚藍

    7.取5~20μl抽提液上樣進行SDS凝膠電泳。


     
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