質粒DNA的大量制備

    （1）將2ml含相應抗生素的LB液體培養基加入到通氣良好的15ml的試管中，接入一單菌落，于37℃劇烈振蕩培養過夜。
　　（2）將1ml含菌液倒入含相應抗生素的Lb 100ml中，37℃振蕩培養至A590=1.0(5～6h)。
　　（3）加氯霉素（170μg/ml）擴增，37℃溫箱中培養過夜。
　　（4）收集菌液于離心管中，冰浴10min。3000rpm,離心10min，去上清。
　　（5）加溶液Ⅰ5ml懸浮菌體，將懸液倒入高速離心管中，搖勻，冰浴5min。
　　（6）加溶液Ⅱ10ml輕輕混勻，室溫下5min。
　　（7）加溶液Ⅲ7.5ml輕輕混勻，冰浴30min。15000rpm，4℃離心20min。
　　（8）取上清液于高速離心管中，加2倍體積的無水乙醇，混勻，入-20℃3～5h。
　　（9）15000rpm 4℃ 離心20min。
　　（10）棄上清，將離心管倒放入真空泵中抽干（10～15min）。
　　（11）用5ml1×TE溶解，加入RNase A 15～20μl，42℃水浴4h于過夜。
　　（12）加入5ml飽和酚，混勻，4000～5000rpm離心5min，取上清液入5ml離心管內。
　　（13）分別加入2.5ml飽和酚，2.5ml氯仿，混勻后同樣離心收集上清。
　　（14）加等體積氯仿/異戊醇（24：1）混勻，同樣離心收集上清。
　　（15）加入1/10體積的3mol/l NaAc及2倍體積的無水乙醇于-20℃3～5h。
　　（16）10000rpm 4℃離心20min。
　　（17）棄上清，加入75%乙醇洗滌2次。
　　（18）離心棄上清，真空抽干，加入適量1×TE溶解質粒DNA。