基因拼接SDL法

SDL方法（Gene splicing by directed liga- tion），即直接拼接法，在SOE法基礎上又有新的突破：
　�。�1）限制性內切酶，EcoRI核酸內切酶（或其它Ⅱs類限制性內切酶）能專一性識別 6bp的非回文序列，并能單向特異性地切斷EcoRI識別的6bp以外的1—5個核苷酸，產 生一個以突出的4個核苷酸為結尾的5'末端。因而該伸頭末端與酶切位點序列無關， 而是由切點附近的序列決定的。
　　（2）擴增時實際運用的引物的構建。以exon5的實用引物為例：5'鏈引物包括常規5' 鏈引物序列和BamHI識別位點及起密碼序列；3'鏈引物包括常規3'鏈引物和AC及EcoRI 識別位點。
　�。�3）唯一性末端的形成。經擴增和限制性內切酶處理后可得供拼接的exon5，它的右 側突出末端TCAC中，TC為原始exon5的一部分，AC為原始exon6的一部分，且TCAC與 exon6的AGTG互補配對，其余類推。因為這種結尾相同的幾率為1/259，故可被視作 “唯一性末端”。
　　（4）把經擴增的exon5、exon6和exon7混合，依據堿基互補配對原則，它們就能按順 序依次拼接。