自主序列復制系統

　　自主序列復制系統(self-sustainedsequence replication，3SR)，又稱依賴核酸序列的擴增(Nucleic acid sequence-based amplification，NASBA)或再生長序列復制技術.1990年Guatelli等首先報道了這一技術.NASBA主要用于RNA的擴增、檢測及測序.該反應有賴于AMV逆轉錄酶，T7RNA多聚酶和核酸酶H(RNaseH)共同協作而完成.
　　3SR反應體系中除含有上述三種酶外，還含有dNTP，NTP(核糖核苷)，兩種特殊的引物和緩沖液.引物I3'末端與靶序列互補，5'端含T7RNA多聚酶的啟動子，這一引物是用于合成cDNA的.引物Ⅱ的堿基序列與cDNA的5'未端互補.
　　在3SR反應時，首先引物Ⅰ與RNA模板復性(結合)，AMV逆轉錄酶催化合成cDNA，RNaseH水解cDNA上的RNA，形成一條單鏈的DNA;引物Ⅱ隨即與此cDNA的5'未端結合，逆轉錄酶在此DNA模板的指導下合成第二條DNA鏈.這樣形成的DNA雙鏈含有T7RNA多聚酶的啟動子.該酶即以此DNA為模板，轉錄出與樣品RNA序列相同的RNA鏈，而且每條DNA模板在該酶的作用下可合成約100個拷貝的RNA.每條新的RNA又可作為逆錄酶的模板合成cDNA.如此反復進行，將獲得更多的RNA和cDNA.
　　其基本方法為:將引物，標本加入擴增反應液，65℃1min使RNA分子二級結構打開，降溫至37℃加入逆轉錄酶，T7RNA聚合酶和RNaseH，并在37℃反應1～1.5小時，其產物經瓊脂糖電泳，溴乙錠染色即可在紫外儀下看到條帶.NASBA的特點為操作簡便，不需特殊儀器，不需溫度循環.整個反應過程由三種酶控制，循環次數少，忠實性高，其擴增效率高于PCR，特異性好.