聚丙烯酰胺凝膠電泳protocal

根據分離DNA片段的大小及需凝膠的容積，配制聚丙烯酰胺凝膠.
　　1.按要求裝配好垂直電泳板，兩塊玻璃板的兩側及底部用1%的瓊脂 糖封邊，防止封閉不嚴而使聚丙烯酰胺液漏出.
　　2.將裝好的玻璃電泳板傾斜成45～60℃角.
　　3.按表3配制所需%濃度凝膠的毫升數.
　　4.加入TEMED后，立即混勻，緩緩倒入兩玻璃板間的膠床中，直到液 體接近溢出時為止.
　　5.立即插入適當的梳子，密切注意防止梳齒下產生氣泡，用一有力 的夾將梳子夾在一邊的玻璃板上，然后將玻璃板斜靠在物體上，使 成10°角，可減少液體泄漏的機會.
　　6.室溫聚合一小時后，將玻璃板插入電泳槽中，上緊，倒入0.1XTBE 緩沖液.
　　7.小心取出梳子，立即用緩沖液沖洗加樣孔，因為梳子取出后，梳 子上吸附的及凝膠頂部未聚合的丙烯酰胺會流入加樣孔內聚合，產 生不規則的表面，將導致以后DNA電泳帶型不規則.
　　8.將DNA樣品與適量的載樣緩沖液混勻后，加到樣品孔內，加樣時不 要產生氣泡.
　　9.接好電極，電壓為1-8V/cm，進行電泳.
　　10.根據指示劑遷移位置來判定是否終止電泳.
　　11.電泳畢，切斷電源，棄去電泳儀，取出膠床板，小心移去一塊玻 璃板，讓凝膠吸附在另一塊玻璃板上.浸入含0.5ug/ml的溴化乙錠溶 液中，15～30min后取出水洗紫外儀下觀察結果.
　　12.聚丙烯酰胺凝膠電泳只能檢出>10ng以上量的DNA條帶.要求更高 的靈敏度，可用銀染.