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    RNA變性電泳法檢測RNA質量

    放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-01

    采用RNA變性電泳法檢測RNA質量,方法如下:
    ⑴ 凝膠制備:
    制備1.2%瓊脂糖凝膠(電泳槽體積為50ml)
    ① 稱取0.6g瓊脂糖,加入43.5ml水,加熱溶解并降溫到60℃。
    ② 加入5ml 10×甲醛變性電泳緩沖液,并加入1.5ml 37%的甲醛,混合均勻。
    ③ 倒入電泳槽中制膠(甲醛有毒,制膠應在通風櫥中進行)。
    ⑵ RNA模板準備(5~7.5μg total RNA)
    ① 制備如下混合液 (9.7μl)
    10×甲醛變性電泳緩沖液: 1.25μl
    37%的甲醛: 2.2μl
    甲酰胺: 6.25μl

    ② 加入2.8μl RNA,使總體積達到12.5μl
    ③ 混合后離心5~10 sec(1 000~2 000 r/min)
    ④ 55℃加熱15 min
    ⑤ 加入2.5μl甲醛凝膠加樣緩沖液,再加點EB(約0.2~0.5μl),混合后離心5 sec
    ⑥ 將樣品加入點樣孔
    ⑦ 在5v/cm的電壓下電泳至溴酚藍帶跑到電泳槽中央(20cm長電泳槽,用95v電壓,1小時左右)

     

     
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