影響ELISA試驗效果常見問題原因分析及解決辦法

操作步驟

可能原因

解決辦法

選擇試劑

選擇質量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

加 樣

1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣；
2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時)；
3.加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。

1.標本為血清：最好將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。
2.加樣后及時放入孵箱。
3.加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4.如果采用AT或其他全自動加樣，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5.標本較多時，請分批操作。

孵 育

1.孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底；
2.孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底。

1.貼封片或加蓋；
2.按說明步驟嚴格控制操作時間。

洗 板

1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2.采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導致洗板效果差。
3.反應板過多造成洗板等待時間長。

1.保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后最好在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
2.合理安排，或多用幾臺洗板機。

顯 色

1. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；
2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。

1. 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用；
2. 加樣時保持顯色劑不外流；
3.A、B液應避免接觸金屬器械。

終 止

加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。

加終止液時應避免產生氣泡。

讀 板

讀板時板底不清潔。

應保證酶標板清潔。

全過程

1.整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸;
2.實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。