碘同位素標記單克隆抗體

同位素標記是一種重要的抗體標記技術，牨977年Yalow等在放射免疫測定法所作突出貢獻而獲得醫學和生理學諾貝爾獎。McAb標記同位素后除應用于放射免疫測定外，還可用于競爭結合試驗、體內腫瘤定位等。

　　(一)　原理

　　氯胺桾即對甲苯碘氯胺鈉，在水溶液中生成次氯酸，為一種溫和氧化劑，當加入到有蛋白質和碘的弱堿水溶液中，可將I２氧化為I＋并結合到氨基酸上。如標記條件溫和，標記后的McAb仍具有良好的結合活性，通過放射性同位素強度的測定可反映相應抗原的含量。

　　(二)　方法

　　　　　　在細胞凍存管內加入純化的McAb100μg／100μl，
　　　　　　再加入10μl 0.05M磷酸緩沖液
　　　　　　再加入10μl(含1mCi)¹²⁵I

　　　　　　　　　　↓

　　　　　加入10μl氯胺-T(5mg／ml溶于0.05M磷酸鹽緩沖液)，孵育時間不超過30秒

　　　　　　　　　　　　　↓

　　　　　　加入100μl偏重亞硫酸鈉(1.2mg／ml溶于0.05M磷酸緩沖液)

　　　　　　　　　　　　　↓

　　　　　　加入200μl　KI溶液(少許結晶KI溶于0.05M磷酸緩沖液＋4％牛血清白蛋白)

　　　　　　　　　　　　　↓

　　　　　　用PD10柱(Sephadex G25)除去游離¹²⁵I
　　　　　　用4％BSA　PBS洗脫

　　　　　　　　　　　　　↓

　　　　　　分部收集，0.5ml／管

　　每管取5μl進行γ計數，計算標記抗體的比活性和標記率

　　　　　　　　　　　結合于McAb１２５I放射性強度(cpm)
　　　　標記率(％)＝───────────────────
　　　　　　　　　　　　　　總放射性強度(cpm)

　　　　　　　　　　　　　　　　結合于某一管McAb上的放射性強度
　　　　比活性(μCi／μgMcAb)＝────────────────
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　某一管McAb總量

　　(三)　試劑器材

　　1.　純化后的McAb

　　2.　0.05M磷酸緩沖液，氯胺桾，偏重亞硫酸鈉，KI，BSA

　　3.　¹²⁵I

　　4.　有通風裝置的超凈臺，γ計數儀

　　5.　PD10柱(Sephadex G25)

　　(四)　注意事項

　　1.　嚴防同位素污染，工作人員必須穿著工作衣，戴口罩、帽子、手套。必須在嚴密的通風櫥或通風超凈臺中操作。操作前后對實驗室環境進行監測。所用¹²⁵I和標記物應妥善保管。

　　2.　如標記細胞因子、激素等，應選用更溫和的標記方法，使保持更好的生物學活性。