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    IgA的分離與提純

    放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

    (一)材料與試劑配制
    1.DEAE52纖維素
    2.0.10Mol/L ZnSO4液
    ZnSO4·7H2O 2.88g
    加水至1 000.00ml
    3.飽和硫酸銨溶液
    4.10%EDTA—Na
    5.SephadexG200
    6.0.01Mol/L pH7.4PB液
    7.0.10Mol/L pH6.4PB液
    8.血清
    (二)操作方法
    1.取血清加等量的0.1Mol/L ZnSO4液,調(diào)pH至7.0,室溫?cái)嚢?h,離心去沉淀。
    2.于上清液中加入等量的飽和硫酸銨溶液,混勻后靜置30min或冰箱過夜。
    3.10 000r/min離心10min,去上清。
    4.取沉淀溶于4ml10%EDTA-Na溶液中。
    5.生理鹽水中透析除鹽。
    6.過DE52柱,用0.01Mol/L pH7.4PB液洗脫蛋白(IgG)棄去。
    7.換用0.1Mol/L pH6.4PB液洗脫,收集蛋白峰,即為IgA。
    8.再過SephadexG200柱,洗液為0.01Mol/L pH7.4PBS(0.14Mol/L NaCl),收集洗脫液測(cè)OD280值,取第一峰即為純化IgA。
    9.透析、濃縮、鑒定。

     
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