染色體步移(chromosome walking)

在克隆基因組基因時，已知該基因在染色體上的位置但沒有該基因的序列信息，無法制備相應的探針，因此無法直接篩查文庫去克隆基因。此時，如果知道離開該基因一定距離上的DNA序列，則可用這個DNA序列作探針，通過染色體步移來逐步接近并最后達到待克隆的基因。其基本原理是用探針篩查文庫，得到陽性克隆后，將這個重組載體中的插入片段分離出來，然后用這個片段的末端部分(注意不能包含重復序列)作為新一輪篩查文庫的探針；得到新的重組載體中的插入片段，同上一個插入片段的末端部分(即探針序列)是重疊的，共有的。也就是這兩個片段是在同一條染色體上相互鄰接的。’于是，再用新得的插入片段的末端部分作為探針，再去篩查文庫。通過一系列的操作，得到的插入片段逐漸連接延伸，最后可以步移到待克隆的基因。當然，在具體操作過程中還必須設(shè)計具體的方法，如同時構(gòu)建跳步文庫(jumping library)和連接文庫(1inking library)等，使插入片段朝著一個方向步移。