羊水細胞染色體標本的制備

一、原理
人的羊水細胞能長成單層并可連續進行傳代培養，但它們的一些特征與一般成纖維細胞不同。在羊水中存在著各種不同類型的胎兒細胞，依據其外形和生長特征可區分為以下三類：上皮細胞（E）、成纖維細胞（F）和羊水細胞（AF）。E細胞在胰酶消化的連續培養中不再生長，所以在培養過程中的生長期最短。AF細胞在再培養中一開始就長得很好，染色體分析大多用這類細胞。F細胞在再培養中潛在的生長期最長，在較老的羊水培養物中占優勢。通常在培養后3—4天（可能更早些）即出現E細胞的集落，它們不適合再培養作染色體分析。大約在第7天出現的AF細胞可被用于染色體制備。如果在培養后第10天還未見長出新的細胞，就應考慮第二次羊膜穿刺。
二、用品和試劑
滅菌刻度離心管，0.25%胰蛋白酶，生長培養基（成分：RPMI-1640 80%，滅活小牛血清20%），其余同外周血染色體制備。
三、操作步驟
1．10—20ml無菌羊水，1000—1500rpm離心10分鐘，吸去上清，保留1ml羊水和沉降的細胞。
2．用吸管使之懸浮，并吸至25ml細胞培養瓶中，每瓶含約0.3—0.5ml細胞懸液，再向其加入3ml生長培養基。
3．搖勻后37℃靜止培養5—7天（不要挪動，以免影響細胞貼壁）。
4．倒置顯微鏡觀察，可見部分細胞貼壁生長并形成細胞小島，此時可以換液。
5．常規細胞培養至第9—11天即可收獲細胞。
6．終止培養前4小時加秋水仙堿，使終濃度為0.1微克/毫升。
7．培養結束用1ml胰蛋白酶液消化5分鐘，終止消化，并轉移至10ml離心管中，1000rpm離心10分鐘，收集細胞。
8．常規制備染色體，步驟同外周血染色體制備。