PI能夠插入雙鏈DNA中。它被活細胞排斥但能穿透正在死亡或已經(jīng)死亡的細胞的細胞膜。
Ⅰ、材料
1、PI（e.g.,Cat #537059,Calbiochem,San Diego,CA）
2、緩沖體系：1×PBS(Ca2 and Mg2 free,e.g.,Cat#9240,Irvine Scientific,Santa Ana,CA) 2%新鮮小牛血清＋0.1%疊氮鈉
A、 PI緩沖液
用緩沖液將PI溶解至終濃度為1mg/ml中，于4℃下密封避光保存1個月。
B、 PI濃縮液
用緩沖液將PI溶解至終濃度為500mg/ml，于4℃下密封避光保存。我們已經(jīng)檢測過將PI濃縮液放置數(shù)月后，并無觀察到染色活性的丟失。
Ⅱ、方法：
將樣品細胞按程序描述的方法用FITC標(biāo)記的單克隆抗體進行單色染色。
A、 在最后的洗滌步驟后，將樣品細胞懸浮于PI緩沖液中，于4℃下密封避光保存以備通過流式細胞儀分析；
B、 在最后的洗滌步驟后，如前述將樣品細胞懸浮后備用。如果您想檢測樣品細胞活力，在每一管中加入2μl的PI濃縮液，混勻。將樣品置于4℃下密封避光保存以備流式細胞儀分析。
注意：此法并不適用于甲醛固定的樣品。在根據(jù)Sasaki等人的方法（Cytometry 8:413,1987）用PE標(biāo)記的抗體對樣品進行染色時可以適用此方法。然而，由于PI和PE的發(fā)射光譜的廣泛交迭，因此本方法適于用7-氨基-放線菌素D將死細胞加以區(qū)分。