染色體掃描電鏡標本制備及觀察

一、原理
掃描電鏡用于觀察標本的表面形態。用戊二醛和鋨酸處理的染色體標本，經單寧酸(或硫卡巴肼)還原可獲得較好的導電染色效果。在掃描電鏡下可觀察到染色體的三維結構，也可用于常規染色體核型、G帶染色體核型、高分辨染色體核型的分析及染色體結構異常識別，以彌補光鏡的許多不足。在掃描電鏡下還可清楚地觀察到腫瘤細胞癌基因擴增結構—雙微體。因而此方法廣泛用于細胞生物學和遺傳學的許多研究。
二、染色體標本制備的方法
1．常規染色體標本制備，同實驗十。
2．取一張在光鏡下觀察過的染色體標本片選擇分散良好的分裂相，并在背面做出標記以便電鏡觀察時易于尋找。
3．3:1甲醇一冰乙酸脫色，用磷酸緩沖液洗。
4．2.5％戊二醛固定30分鐘。
5．0.1mol／L(pH7.4)PBS漂洗3次。
6．1％鋨酸固定5分鐘。
7．蒸餾水洗3次。
8．2％單寧酸處理5分鐘。
9．蒸餾水洗3次。
10．1％鋨酸處理lO分鐘。
11．水洗3次。
12．30％→100％乙醇逐級脫水，每級5分鐘。
13．臨界點干燥(也可用空氣干燥)。
14．把標本片標記的核型所在處用玻璃切下約5×5mm2，用導電膠固定在標本臺上。
15．離子鍍膜(也可不鍍膜直接觀察)。
16．掃描電鏡觀察、照相。
三、染色體形態觀察
低倍觀察可見染色體的不同分裂相，在分散較好的分裂相中，染色體呈三維立體形態。
高倍觀察染色體呈長短不等的園柱狀，兩條單體由著絲粒相連，其表面凹凸不平，沿縱軸有許多環形溝把染色體分成許多節段。可見染色體表面由許多細纖維構成。