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    固定細胞的PI單染色法

    放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-08

    方法一

    1.收集細胞(1~5)×106個,500~1000r/min離心5min,棄去培養液。
    2.3ml PBS洗一次。
    3.離心去PBS,加入冰預冷的70%的乙醇固定,4℃,1h。
    4.離心棄去固定液,3ml PBS重懸5min。
    5.400目的篩網過濾1次,500~1000r/min離心5min,棄去PBS。
    6.用1ml PI染液,4℃避光30min。
    7.流式細胞儀檢測:PI用氬離子激發熒光,激發光波波長為488nm,發射光波波長大于630nm,產生紅色熒光,可分析前散射光對側散射光的散點圖及PI熒光的直方圖。

    方法二

    1.收集細胞(1×106個),500~1000r/min離心5min,棄去培養液。
    2.1ml PBS/FCS洗一次。
    3.500~1000r/min離心5min去PBS/FCS,加入500μl PBS/FCS和500μl的多聚甲醛固定液,輕輕混勻,在4℃下固定4min。
    4.500~1000r/min離心5min棄去固定液,室溫加入含0.2% Tween的PBS 1ml,37℃孵育15min。
    5.1ml PBS/FCS洗3次,每次5min。
    6.400目的篩網過濾1次。
    7.500~1000r/min離心5min去PBS/FCS,用1.0ml PI染液,4℃避光至少30min。染色在24h之內皆可行,流式細胞儀分析。

     

     
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