1.目的

規(guī)范無菌室的使用管理，保持無菌室的衛(wèi)生環(huán)境，保證微生物檢測結(jié)果的準確性。

2.適用范圍

適用于實驗室無菌室的使用和管理。

3.職責

3.1實驗室檢驗員負責無菌室的日常使用、維護。

3.2實驗室領(lǐng)班負責無菌室的管理。

3.3部長負責對無菌室管理情況進行監(jiān)督檢查。

4.內(nèi)容及要求

4.1準備工作

4.1.1 無菌室的準備

4.1.1.1 無菌室應(yīng)設(shè)有無菌操作間、緩沖間和更衣室，無菌操作間潔凈度應(yīng)達到10000級，室內(nèi)溫度保持在20-24℃，濕度保持在45-60%。超凈臺潔凈度應(yīng)達到100級。

4.1.1.2 無菌室經(jīng)常保持清潔，每次使用前用紫外燈照射或臭氧消毒30分鐘以上方可使用，并且同時打開超凈臺進行吹風。

4.1.1.3 無菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液，如75%酒精、0.1%的新潔爾滅溶液等。

4.1.1.4 無菌室應(yīng)保持清潔，嚴禁堆放雜物，以防污染。

4.1.1.5 無菌室要求最大限度保持無菌狀態(tài)，禁止在無菌室以內(nèi)從事與微生物檢測操作無關(guān)的活動。

4.1.2 著裝準備

4.1.2.1無菌室用工作服、帽、鞋、口罩用前必須經(jīng)過紫外燈或臭氧消毒，無菌室的工作服應(yīng)經(jīng)常清洗，保持整潔。

4.1.2.2進入無菌室要穿專用無菌工作服、帽、鞋、口罩，不準將無菌室的工作服、鞋、帽穿出室外。

4.1.3操作人員準備

操作人員在進行無菌操作前，雙手必須進行洗手消毒（75%酒精、0.1%新潔爾滅溶液等）。非操作人員嚴禁進入無菌室。

4.2 操作要求

4.2.1 需要帶入無菌室使用的儀器、器械、平皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴密，并應(yīng)經(jīng)過適宜的方法滅菌。

4.2.2 待檢樣品在檢查前，應(yīng)保持外包裝完整，不得開啟，以防污染。

4.2.3 進入無菌室后，隨手關(guān)好門，操作過程中嚴禁人員出入。

4.2.4 無菌操作應(yīng)在超凈臺上進行，每次操作過程中，均應(yīng)做空白對照試驗樣，以檢查無菌操作的可靠性。檢測過程嚴格按照檢測規(guī)程進行，確保檢測結(jié)果準確無誤。

4.2.5 儀器、器械、平皿等物品需從傳遞窗口傳入無菌室。

4.2.6 如有菌液或樣品灑在超凈臺上，應(yīng)立即用75%的酒精棉球擦拭干凈，在消毒處理。

4.2.7 滅菌后物品放在指定位置，注明滅菌日期，高壓滅菌物品可存放3天，過期不能再用，需重新包裝滅菌。

4.3 清洗要求

4.3.1 帶有菌液的吸管、試管、培養(yǎng)皿等器皿應(yīng)浸泡在盛有0.1%新潔爾滅溶液或其它消毒溶液的消毒桶內(nèi)消毒。

4.3.2 凡帶有活菌的物品，必須經(jīng)消毒后，才能在水龍頭下沖洗，嚴禁污染下水道。

4.3.3 操作完畢，臺內(nèi)物品全部取出并用消毒液噴灑消毒，用后的物品歸位，垃圾帶出無菌室，再用紫外燈輻照20分鐘。

4.4無菌室的清潔消毒

4.4.1 無菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。

4.4.2 無菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在超凈工作臺開啟的狀態(tài)下，取無菌培養(yǎng)皿分別放置工作位置的左中右等處，開蓋暴露15分鐘后，倒置于36℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，取出檢查。100級超凈臺平板雜菌數(shù)平均不得超過1個菌落，10000級無菌操作間平均不得超過3個菌落。如超過限度，應(yīng)對無菌室進行徹底消毒，直至重復(fù)檢查合乎要求為止。

4.4.3 除每日進行清潔和使用前的殺菌之外，要根據(jù)空白樣的檢測情況，及時對無菌室進行徹底的熏蒸或消毒。