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一、增菌
稱(chēng)取檢樣25g，加入裝有225mLGN增菌液的500mL廣口瓶?jī)?nèi)，固體食品用均質(zhì)器以8000-10000r/min打碎1min，或用乳缽加滅菌砂磨碎，粉狀食品用金屬匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培養(yǎng)6～8h。
培養(yǎng)時(shí)間視細(xì)菌生長(zhǎng)情況而定，當(dāng)培養(yǎng)液出現(xiàn)輕微混濁時(shí)即應(yīng)中止培養(yǎng)。
二、分離和初步生化試驗(yàn)
取增菌液1環(huán)，劃線(xiàn)接種于HE瓊脂平板或SS瓊脂平板1個(gè)；另取1環(huán)劃線(xiàn)接種于麥康凱瓊脂平板和伊紅美藍(lán)瓊脂平板各1個(gè)，于36℃培養(yǎng)18～24h。
志賀氏菌在這些培養(yǎng)基上呈現(xiàn)無(wú)色透明不發(fā)酵乳糖的菌落。
在沙門(mén)氏菌的檢驗(yàn)中，有時(shí)也使用HE、SS平板進(jìn)行初步篩選。
SN 0332-94 出口食品中沙門(mén)氏菌(辛酯酶熒光)檢驗(yàn)方法
挑取平板上的可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂和葡萄糖半固體各1管。一般應(yīng)多挑幾個(gè)菌落，以防遺漏，經(jīng)36℃培養(yǎng)18～24h，分別觀察結(jié)果。
下述培養(yǎng)物可以棄去：
a. 在三糖鐵瓊脂斜面上呈蔓延生長(zhǎng)的培養(yǎng)物；
b. 在18～24h內(nèi)發(fā)酵乳糖、蔗糖的培養(yǎng)物；
c. 不分解葡萄糖和只生長(zhǎng)在半固體表面的培養(yǎng)物；
d. 產(chǎn)氣的培養(yǎng)物；
e. 有動(dòng)力的培養(yǎng)物；
f. 產(chǎn)生硫化氫的培養(yǎng)物。
凡是乳糖、蔗糖不發(fā)酵，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣(福氏志賀氏菌6型可產(chǎn)生少量氣體)，無(wú)動(dòng)力的菌株，可做血清學(xué)分型和進(jìn)一步的生化試驗(yàn)。
三、血清學(xué)分型
挑取三糖鐵瓊脂上的培養(yǎng)物，做玻片凝集試驗(yàn)。
先用4種志賀氏菌多價(jià)血清檢查，如果由于K抗原的存在而不出現(xiàn)凝集，應(yīng)將菌液煮沸后再檢查；
如果呈現(xiàn)凝集，則用A1、A2、B群多價(jià)和D群血清分別試驗(yàn)。
如系B群福氏志賀氏菌，則用群和型因子血清分別檢查。福氏志賀氏菌各型和亞型的型和群抗原見(jiàn)表1。可先用群因子血清檢查，再根據(jù)群因子血清出現(xiàn)凝集的結(jié)果，依次選用型因子血清檢查。
4種志賀氏菌多價(jià)血清不凝集的菌株，可用鮑氏多價(jià)1、2、3分別檢查，并進(jìn)一步用1～15各型因子血清檢查。如果鮑氏多價(jià)血清不凝集，可用痢疾志賀氏菌3～12型多價(jià)血清及各型因子血清檢查。
附：福氏志賀氏菌各型和亞型的型抗原和群抗原
四、進(jìn)一步的生化試驗(yàn)
在做血清學(xué)分型的同時(shí)，應(yīng)做進(jìn)一步的生化試驗(yàn)，即：
葡萄糖銨
西蒙氏檸檬酸鹽
賴(lài)氨酸和鳥(niǎo)氨酸脫羧酶
pH7.2尿素
KCN生長(zhǎng)
水楊苷和七葉苷的分解
除宋內(nèi)氏菌和鮑氏13型為烏氨酸陽(yáng)性外，志賀氏菌屬的培養(yǎng)物均為陰性結(jié)果。
。必要時(shí)還應(yīng)做革蘭氏染色檢查和氧化酶試驗(yàn)，應(yīng)為氧化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌。生化反應(yīng)不符合的菌株，即使能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集，仍不得判定為志賀氏菌屬的培養(yǎng)物。
已判定為志賀氏菌屬的培養(yǎng)物，應(yīng)進(jìn)一步做
5%乳糖發(fā)酵
甘露醇
棉子糖
甘油的發(fā)酵
靛基質(zhì)試驗(yàn)
志賀氏菌屬4個(gè)生化群的培養(yǎng)物，應(yīng)符合該群的生化特性。但福氏6型的生化特性與A群或C群相似。
附：志賀氏菌屬四個(gè)群的生化特性
五、結(jié)果報(bào)告：綜合生化和血清學(xué)的試驗(yàn)結(jié)果判定菌型并作出報(bào)告。
