紫外可見(jiàn)分光光度分析的定量依據(jù)是光吸收定律，但具體操作方法卻有多種

4.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法
即工作曲線(xiàn)法，適用于大量重復(fù)的樣品分析，是工廠(chǎng)控制分析中應(yīng)用最多的方法。
根據(jù)光吸收定律，對(duì)于一種有色化合物，ε是一個(gè)定值，若把光程L也固定，那么吸光度A就和溶液的濃度c成正比，也就是說(shuō)吸光度A和濃度c呈線(xiàn)性關(guān)系。
配制一系列適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，顯色后分別測(cè)定其吸光度，把吸光度A對(duì)濃度c作圖，即得工作曲線(xiàn)。

4.2.2 直接比較法

直接比較法其實(shí)質(zhì)也是工作曲線(xiàn)法，是一種簡(jiǎn)化的工作曲線(xiàn)法。
配一個(gè)已知被測(cè)組分濃度為cs的標(biāo)樣，測(cè)其吸光度為As，在同樣條件下再測(cè)未知樣品的吸光度為Ax，通過(guò)計(jì)算可求出未知樣品的濃度cx。
As=εcsL
Ax=εcxL
由于溶液性質(zhì)相同，比色皿厚度一樣，所以As/Ax=cs/cx
式中：
cs-已知被測(cè)組分的濃度，mol/L；
cx-未知樣品的濃度，mol/L；
As-已知被測(cè)組分的吸光度；
Ax-未知樣品的吸光度。
直接比較法簡(jiǎn)化了繪制工作曲線(xiàn)的步驟，適用于個(gè)別樣品的測(cè)定。
操作時(shí)應(yīng)注意配制標(biāo)樣的濃度要接近被測(cè)樣品的濃度，這樣能減少測(cè)量誤差。

4.2.3 標(biāo)準(zhǔn)加入法

標(biāo)準(zhǔn)加入法是工作曲線(xiàn)的一種特殊應(yīng)用。
選擇適當(dāng)?shù)娘@色條件，先測(cè)定濃度為cx的未知樣品吸光度為Ax，再向未知樣品中加入一定量的標(biāo)樣，配置成濃度為cx+Δc1、cx+Δc2……一系列樣品，分別顯色后再測(cè)定吸光度為A1、A2……最后在坐標(biāo)紙上繪圖，以吸光度A為縱坐標(biāo)，以濃度c為橫坐標(biāo)，分別畫(huà)出Δc1、Δc2所對(duì)應(yīng)的A1、A2等各點(diǎn)，連成直線(xiàn)后延長(zhǎng)，與橫軸的交點(diǎn)cx也就是未知樣品的濃度cs。
應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)加入法時(shí)要注意，加入的標(biāo)樣濃度要適當(dāng)，使畫(huà)出的曲線(xiàn)保持適當(dāng)角度，濃度過(guò)大或過(guò)小都會(huì)帶來(lái)測(cè)量誤差。
這種方法操作比較麻煩，不適于作系列樣品分析，但它適用于組成比較復(fù)雜，干擾因素較多而又不太清楚的樣品，因?yàn)樗�能消除背景的影響�?/span>